Anticorps secondaire de lapin anti-IgG de chèvre (H+L)

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Principaux avantages

Contexte

Le plus souvent, les anticorps secondaires sont générés en immunisant l'animal hôte avec une population d'immunoglobulines de l'espèce cible. L'antisérum de l'hôte est ensuite purifié par chromatographie d'immunoaffinité pour éliminer toutes les protéines sériques de l'hôte, à l'exception de l'anticorps spécifique d'intérêt. Les anticorps secondaires purifiés sont ensuite adsorbés en phase solide avec d'autres protéines sériques d'espèces pour minimiser la réactivité croisée dans les préparations tissulaires ou cellulaires, puis sont modifiés par fragmentation d'anticorps, conjugaison d'étiquettes, etc., pour générer des réactifs hautement spécifiques. Les anticorps secondaires peuvent être conjugués à un grand nombre d'étiquettes, notamment des enzymes, de la biotine et des colorants/protéines fluorescents. Ici, l'anticorps fournit la spécificité pour localiser la protéine d'intérêt, et l'étiquette génère un signal détectable. L'étiquette de choix dépend de l'application expérimentale.

Les anticorps biotinylés sont largement utilisés dans les systèmes où une amplification du signal est souhaitée. Souvent, 15 à 20 moitiés de biotine sont couplées à un seul anticorps secondaire IgG. La biotine se lie à l'avidine, à la streptavidine ou à la neutravidine avec un degré élevé d'affinité et de spécificité. Dans les immunoessais, la liaison avidine/streptavidine-biotine est utilisée comme pont entre les anticorps et les rapporteurs comme les enzymes (HRP, AP), les fluorophores, les chromophores, etc. L'avidine et la streptavidine sont toutes deux des protéines tétramériques capables de lier 4 groupes biotine à chaque molécule d'avidine ou de streptavidine, amplifiant ainsi l'intensité du signal et la sensibilité de détection en augmentant la concentration des rapporteurs au site antigénique. Deux principaux systèmes de détection par liaison à la biotine ont été largement utilisés : les méthodes Avidine-Biotine Complexe (ABC) et Streptavidine Biotine Marquée (LSAB). Dans la méthode ABC, de l'avidine libre (ou streptavidine) est utilisée comme pont/lien entre l'anticorps biotinylé et une molécule rapporteur biotinylée, ce qui entraîne trois molécules rapporteurs couplées à l'anticorps biotinylé. La méthode LSAB utilise une streptavidine marquée par un rapporteur (avidine ou neutravidine peut être utilisée alternativement) pour détecter l'anticorps secondaire biotinylé lié sur la coupe tissulaire, la membrane de transfert ou la plaque ELISA, améliorant la sensibilité de détection par un facteur 8. La méthode LSAB est utilisée lorsque le complexe avidine-biotine-enzyme de la méthode ABC devient trop grand pour pénétrer le tissu.

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