DAPI (4',6-diamidino-2-phénylindole, dichlorhydrate) pour la coloration des acides nucléiques

Le DAPI (4',6-diamidino-2-phénylindole) est un colorant fluorescent qui peut se lier solidement aux brins d'ADN, la fluorescence étant détectée par un microscope à fluorescence. Le DAPI peut colorer les cellules vivantes et fixées car il peut traverser une membrane intacte, avec une efficacité plus élevée dans les cellules fixées. La formule moléculaire est C16H15N5·2HCl avec un poids moléculaire de 350,25 g/mol, numéro CAS 28718-90-3. Le DAPI peut traverser les membranes cellulaires et nucléiques et se lier à l'ADN double brin dans le noyau, produisant une fluorescence 20 fois plus forte que lui-même. L'efficacité détectée par microscope à fluorescence est très élevée (presque 100%), sans effets secondaires pour les cellules vivantes. La sensibilité pour la coloration de l'ADN double brin au DAPI est beaucoup plus grande que celle au bromure d'éthidium (EB). La coloration au DAPI est généralement utilisée dans la détection de la mort cellulaire, car elle pénètre plus efficacement et génère une fluorescence plus forte dans les cellules mortes. Après coloration au DAPI, détecter avec un microscope à fluorescence ou une cytométrie en flux. Des cellules fluorescentes bleues seraient vues au microscope après coloration. La plus grande longueur d'onde d'excitation pour le DAPI est de 340 nm (ultraviolet), et la plus grande longueur d'onde d'émission est de 488 nm (bleu). Lorsque le DAPI se lie à l'ADN double brin, la plus grande longueur d'onde d'excitation est de 360 nm, tandis que la plus grande longueur d'émission devient 460 nm. L'émission bleue du DAPI le rend approprié pour les essais combinés où les plages de fluorescence du DAPI et d'autres molécules fluorescentes utilisées en IHC comme la fluorescéine et la GFP à fluorescence verte, ou les colorants à fluorescence rouge comme le Texas Red, sont complètement distinctes.